本試劑盒提供全套試劑,適用于從各種哺乳動物細(xì)胞(原代或傳代細(xì)胞、貼壁或懸浮細(xì)胞等)和各種實體軟組織(如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織)提取總蛋白。提取過程簡單方便,無須超速離心機。本試劑盒含有的du特變性劑能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等蛋白研究。
使用方法:
A. 細(xì)胞總蛋白提取
1. 每500 μl裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入5 μl PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 取5-10×106個細(xì)胞,在4℃,500 g條件下離心5-10分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集細(xì)胞。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個細(xì)胞中加入500 μl冷的裂解液,混勻后,在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5. 在4℃,16,000 g條件下離心15分鐘。
6. 快速將上清轉(zhuǎn)移至另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到總蛋白。
B. 組織總蛋白提取
1. 每500 μl裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入5 μl PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 取100 mg組織樣本剪碎,加入裂解液,用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管中,在4℃,16000 g條件下離心5分鐘。
4. 快速將上清轉(zhuǎn)移至另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到總蛋白。
上述蛋白提取物可立即用于后續(xù)實驗,或分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/div>
注意事項:1. 實驗過程中的所有試劑可冰上預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。
2. 整個過程須保持樣品處于低溫狀態(tài)。
3. 蛋白濃度用BCA法測定 。
以上就是蛋白提取試劑盒的使用方法,以上知識僅供參考,希望對您有所幫助!